高效液相设备中什么最重要,高效液相色谱中能测试哪些领域的物质
来源:整理 编辑:汇众招标 2023-03-31 17:44:21
1,高效液相色谱中能测试哪些领域的物质
高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质,因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂,抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析.
2,高效液相色谱仪最重要的部件是什么
泵 进样器 检测器 一个都不能少泵考查保留时间稳定性 进样器和检测器保证峰面积重现性 色谱柱温也会影响保留时间稳定chg的图?您的图谱是什么液相做的?只有在工作站中能打开色谱图。分析测试百科,分析行业的百度知道,祝你实验顺利,科研有成。
3,高效液相色谱仪的高压输液系统有何作用
高压输液系统俗称高压泵,是整台机器的动力来源,流动相由高压泵从试剂瓶中抽出,流经进样口,色谱柱,检测器最后流出色谱仪。可以说没有高压泵的提供的压力,仅靠流动相自身的重力和扩散,整个过程要漫长到难以忍受的程度。早期液相色谱是没有高压泵的,一个样的分析动辄数十小时甚至数天,而且色谱柱也不像现在吸附能力强,这种只能叫液相色谱。自从高压泵被引入液相色谱后,色谱柱分离变得更高效,分析时间极大缩短,一个样品只用数分钟即可,这样的液相色谱才叫高效液相色谱。
4,高效液相色谱仪主要包括哪几个部分
高效液相色谱仪般由溶剂输送系统、进样系统、分离系统(色谱柱)、检测系统和数据处理与记录系统组成,具体包括储液器、输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪或数据工作站等几部分。其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体,为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。扩展资料高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱- 质谱联用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱联用也发展很快,如在环境污染分析测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使环境污染分析得到新的发展。
5,高效液相色谱仪器的结构及其各部分作用
1、溶剂输送系统;储液器,用来贮存数量足够、符合要求的流动相。配有溶剂过滤器,以防止流动相中的颗粒进入泵内。脱气器,脱气的目的是为了防止流动相从色谱柱内流出时释放出气泡进入检测器,从而引起噪声,不能正常检测。输液泵,将储液器中的流动相连续不断地以高压形式进入液路系统,使样品在色谱柱中完成分离过程。梯度洗脱装置,是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种装置。2、进样系统;进样器:是将样品送入色谱柱的装置,进样方式可以分为两种:阀进样或自动进样。比较常用的是采用自动进样器装样。3、分离系统;色谱柱:对样品进行分离,是整个色谱系统的心脏,它的质量优劣直接影响到分离的效果。4、检测系统;检测器:将色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号,被数据系统接收,得到样品分离的色谱图。5、数据处理和记录系统;对色谱数据进行处理,并参与HPLC仪器的自动控制。扩展资料与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。参考资料来源:百度百科——高效液相色谱仪按照流动相走的顺序说下吧:储液瓶——装流动相;送液装置(泵)——送液的;进样装置(手动/自动进样)——使样品进入系统中;色谱柱——分离的核心,色谱的心脏,分离的好坏绝大部分取决于色谱柱的选择;检测器——收集信号变化,记录数据变化;工作站——早期的是积分仪,现在基本淘汰,现在一般都是将模拟信号或数字信号的,模拟信号需要转换成数字信号传给电脑,电脑上有软件,进行数据的记录和处理。按照流动相走的顺序说下吧:储液瓶——装流动相;送液装置(泵)——送液的;进样装置(手动/自动进样)——使样品进入系统中;色谱柱——分离的核心,色谱的心脏,分离的好坏绝大部分取决于色谱柱的选择;检测器——收集信号变化,记录数据变化;工作站——早期的是积分仪,现在基本淘汰,现在一般都是将模拟信号或数字信号的,模拟信号需要转换成数字信号传给电脑,电脑上有软件,进行数据的记录和处理;液相色谱的大部分基本就这些,希望对你有帮助
6,高效液相色谱仪器怎么操作啊简单吗
一.开机程序 1.打开氮气总阀,拧紧分压阀。 2.打开稳压电源和色谱仪开关。 3.启动计算机,运行软件,调用预先编辑好的控制方法,下载到色谱仪。 4.待柱箱温度达到控制方法设定的初始值后,测量柱流量: 在皂膜流量计里加入几滴检漏液,把软胶管接在检测器出口; 按色谱仪键盘上的TIME,显示屏出现t=0∶00∶00 1/t=0.00,按ENTER开始计时,再按停止,按CLEAR回零; 若以皂膜流量计的1ml刻度为基准,则测得的柱流量为1(ml)×1/t(s-1),10ml、100ml依此类推; 调节柱头压,得到所需的柱流量。 5.打开空气泵和氢气发生器。 6.调节辅助控制面板流量表的空气和氢气分别至35psi和20psi,把检测器A控制面板的空气和氢气调节钮开到最大,按点火开关点火。 7.慢慢把检测器A控制面板的辅助气调节钮开到最大。 二.软件(HP3398A GC Chemstation)的使用要点与样品的简单测定 1.控制方法: 菜单操作:运行->编辑控制方法->系统system1; 按Edit编辑控制方法; 在Inlet栏选择Back,设置进样器温度;在Oven栏设置柱箱的升温程序;在Detector栏选择Front,设置检测器温度;在General栏Signal项选择1:DetA,2:DetA; 按Send将控制方法下载到色谱仪,关闭,保存。 2.采集: 菜单操作:采集->简单采集->适用于system1; 指定文件前缀、标识符,选择所需的控制方法,按开始; 待色谱仪上的NOT READY指示灯(红)灭后,用微量进样器在进样口2快速进样,马上按色谱仪键盘上的START,计算机屏幕实时显示采集数据的情况; 采集结束后,待红色指示灯灭再开始下一次进样; 若采集过程中要停止,先按色谱仪键盘的STOP,再按采集窗口的STOP。 5.关闭空气泵和稳压电源。 6.关闭氮气总阀,表头回零后拧松分压阀。 将色谱仪上的检测器A控制面板的空气、氢气和辅助气调节钮关至最小。楼上的是气相色谱仪吧我们做过那东西,特难侍候结构一般是高压泵,进样器,分离柱,检测器高效液相主要是靠计算机软件,只要把前面的弄好了后面自动出数,高压泵没什么,设好就行了,进样器最烦,自动的还好,要是手动用微量注射器推的那种会把你弄抓狂,偏差太多,重复性不好,其它的就没什么了,选好波长等着电脑出数就行了原理高效液相层析仪根据各种各样的化工互作用力来分离混合物。这种互作用力通常是分析物及分析管柱之间的一种非共价性质。使用高效液相色谱时,液体待检测物在不同的时间被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,每个峰顶都代表一个另外化合物的种类,最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。用途高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中,常用于医药品、化学、环保、生命科学、与食品工业的研究上。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,可将液体混合物中的成份分离、成分定性及定量分析。适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。
7,高效液相色谱法三大关键部位是什么
高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。1.液固色谱法 使用固体吸附剂,被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附-解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝,粒度5~10μm。适用于分离分子量200~1000的组分,大多数用于非离子型化合物,离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异构体。2.液液色谱法 使用将特定的液态物质涂于担体表面,或化学键合于担体表面而形成的固定相,分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。 涂布式固定相应具有良好的惰性;流动相必须预先用固定相饱和,以减少固定相从担体表面流失;温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化;另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失,现在已很少采用。现在多采用的是化学键合固定相,如c18、c8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(npc)和反相色谱法(rpc)。正相色谱法 采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等)。 反相色谱法 一般用非极性固定相(如c18、c8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。rpc在现代液相色谱中应用最为广泛,据统计,它占整个hplc应用的80%左右。 随着柱填料的快速发展,反相色谱法的应用范围逐渐扩大,现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离,常用缓冲液控制流动相的ph值。但需要注意的是,c18和c8使用的ph值通常为2.5~7.5(2~8),太高的ph值会使硅胶溶解,太低的ph值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在ph 1.5~10范围操作。正相色谱法与反相色谱法比较表正相色谱法 反相色谱法 固定相极性 高~中 中~低 流动相极性 低~中 中~高 组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出 从上表可看出,当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线(如氨基键合固定相)。3.离子交换色谱法 固定相是离子交换树脂,常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架,在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基(称阳离子交换树脂)或季氨基(阴离子交换树脂)。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换,根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。 缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外,它还受流动相的ph值和离子强度影响。ph值可改变化合物的解离程度,进而影响其与固定相的作用。流动相的盐浓度大,则离子强度高,不利于样品的解离,导致样品较快流出。 离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。4.离子对色谱法 又称偶离子色谱法,是液液色谱法的分支。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后,在非极性固定相中溶解度增大,从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。 分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐,如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。 分析酸性物质常用四丁基季铵盐,如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。 离子对色谱法常用ods柱(即c18),流动相为甲醇-水或乙腈-水,水中加入3~10 mmol/l的离子对试剂,在一定的ph值范围内进行分离。被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其ph值、离子强度有关。5.排阻色谱法 固定相是有一定孔径的多孔性填料,流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中,滞留时间长;大分子量的化合物不能进入孔中,直接随流动相流出。它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。常用于分离高分子化合物,如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。色谱法的基本原理利用样品混合物中各组分理、化性质的差异,各组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相对运动时,各组分在两相中反复多次重新分配,结果使混合物得到分离。两相中,固定不动的一相称固定相;移动的一相称流动相。分类:根据流动相分—以气体作流动相—气相色谱——固定相为液体 气-液色谱 固定相为固体 气-固色谱 —以液体作流动相—液相色谱——固定相为液体 液-液色谱 固定相为固体 液-固色谱 —当流动相是在接近它的临界温度和压力下工作的液体时——超临界色谱 根据固定相的附着方式 —固定相装在圆柱管中—柱色谱 —固定相涂敷在玻璃或金属板上—薄膜色谱(平板色谱) —液体固定相涂在纸上—纸色谱(平板色谱)根据分离机理 —分配色谱—样品组分的分配系数不同 —吸附色谱— 样品组分对固定相表面吸附力不同 —体积排阻色谱—利用固定相孔径不同,把样品组分按分子大小分开 —离子交换色谱—不同离子与固定相商相反电荷间的作用力大小不同根据极性 —流动相极性>固定相极性-反相色谱 —流动相极性<固定相极性-正相色谱气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物,而hplc则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质,如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。所以,hplc的应用范围已经远远超过气相色谱。一、吸附色谱(adsorption chromatography)又叫液固色谱法:流动相是液体,固定相是固体。分离原理:固定相是固体吸附剂,吸附剂是多孔性微粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附中 心。各组分的吸附能力不同,使组分在固定相中产生保留时间不同和实现分离。固定相: 固定相通常是强极性的硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂。活性硅胶最常用。流动相: 弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物,如正构烷烃(己烷、戊烷、庚烷等)、二氯甲 烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。 应用: 对于极性,结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法,如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的 分离。 缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。二、分配色谱原理: 固定液机械的吸附在惰性载体上,样品分子依据他们在流动相和固定相间的溶解度不同,分别进入两相分配而实现分离。固定相:将一种极性或非极性固定液吸附在惰性固相载体上。如全多孔微粒硅胶吸附剂。根据极性不同分类:正相分配色谱—固定相载体上涂布的是极性固定液; 流动相是非极性溶剂; 可分立极性较强的水溶性样品; 弱极性组分先洗脱出来。 反相分配色谱—固定相载体上涂布的是非极性或弱极性固定液; 流动相是极性溶剂; 强极性组分先洗脱出来。 液-液分配色谱固定相中的固定液体往往容易溶解到流动相中去,所以重现性很差,且不能进行梯度洗脱,已经不大为人们所采用。三、键合相色谱 考虑分配色谱法中固定液的缺点,因此将各种不同的有机关能团通过化学反应共价结合到固定相惰性载体上,固定相就不会溶解到流动相中去了。键合固定相优点:○ 对极性有机溶剂有良好的化学稳定性 ○使色谱柱的柱效高、寿命长 ○实验重现性好 ○几乎适于各种类相的有机化合物的分离,尤其是k宽范围的样品 ○可以梯度洗脱根据极性不同分类:正相键合相色谱—固定相极性>流动相极性 固定相:二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。 适于分离脂荣、水溶性的极性、强极性化合物 反相键合相色谱—固定相极性<流动相极性 固定相:烷基、苯基等非极性有机分子。如最常用的ods柱或c18柱就 是最典型的代表,其极性很小。 适于分离非机性、弱极性离子型样品, 是当今液相色谱的最主要分离模式。正相hplc(normal phase hplc): 是由极性固定相和非极性(或弱极性)流动相所组成的hplc体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等,代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相hplc。 反相hplc(reversed phase hplc): 由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系,与正相hplc体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ods柱,octa decyltrichloro silane),代表性的流动相是甲醇和乙腈。四、体积排阻色谱(sec,size exclusion chromatograghy)(又称凝胶色谱和分子筛色谱) 原理: 以多孔凝胶(如葡萄糖,琼脂糖,硅胶,聚丙烯酰胺等)作固定相,依据样品分子量大小达到分离目 的。大分子不进入凝胶孔洞,沿多孔凝胶胶粒间隙流出,先被洗脱;小分子进入大部分凝胶孔洞, 在柱中被强滞留,后被洗脱。根据样品性质分类:凝胶过滤(gfc)—用于分析水溶性样品,如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核 苷酸、多糖。 凝胶渗透(gpc)—用于分析脂溶性样品,如测定高聚物的分子量。 sec主要依据分子量大小进行分离,因此与样品、流动相间的相互作用无关。因此不采用改变流动相的组成来改善分离度。 五、离子交换色谱(ion exchange chromatography, iec)分离原理:使用表面有离子交换基团的离子交换剂作为固定相。带负电荷的交换基团(如磺酸基和羧酸基)可以用于阳离子的分离;带正电荷的交换基团(如季胺盐)可以用于阴离子的分离。不同离子与交换基的作用力大小不同,在树脂中的保留时间长短不同,从而被相互分离
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